El objetivo del presente trabajo se basó en la obtención de biomasa a partir de la bacteria Gluconacetobacter diazotrophicus cepa ATCC 49037 (PAL5) a través de la identificación de los componentes más relevantes del medio de cultivo LGI-PN (indicado para el crecimiento del microorganismo), evaluación de diferentes concentraciones de sacarosa en erlenmeyer, y posterior evaluación en cultivo sumergido a nivel de banco de la concentración seleccionada de sacarosa. En la identificación de los componentes más relevantes del medio de cultivo, la variabilidad de las concentraciones de los componentes del medio no influyó sobre la producción de biomasa de G. diazotrophicus, debido a que no se evidenciaron diferencias significativas durante el análisis de varianza (P<0,05). Por lo tanto se continuó con la evaluación de las diferentes concentraciones de sacarosa para la producción de biomasa de la bacteria (diseño a una vía), en la cual se obtuvieron los mejores resultados empleando 30 g/L.