El objetivo del presente trabajo se basó en la obtención de biomasa a partir de la bacteria Gluconacetobacter diazotrophicus cepa ATCC 49037 (PAL5) a través de la identificación de los componentes más relevantes del medio de cultivo LGI-PN (indicado para el crecimiento del microorganismo), evaluación de diferentes concentraciones de sacarosa en erlenmeyer, y posterior evaluación en cultivo sumergido a nivel de banco de la concentración seleccionada de sacarosa. En la identificación de los componentes más relevantes del medio de cultivo, la variabilidad de las concentraciones de los componentes del medio no influyó sobre la producción de biomasa de G. diazotrophicus, debido a que no se evidenciaron diferencias significativas durante el análisis de varianza (P<0,05). Por lo tanto se continuó con la evaluación de las diferentes concentraciones de sacarosa para la producción de biomasa de la bacteria (diseño a una vía), en la cual se obtuvieron los mejores resultados empleando 30 g/L. Finalmente se realizó el cultivo sumergido empleando el medio de cultivo seleccionado en el diseño a una vía con 30g/L de sacarosa para evaluar el crecimiento de la bacteria, encontrándose una concentración de biomasa a las 366 h de 0,35 g/L. La concentración de azúcares totales fue fluctuante en las etapas iniciales del cultivo, sin embargo a las 186 horas se reguló su comportamiento y se evidenció una disminución paulatina de los valores obtenidos hasta obtener una concentración final de 34 g/L a las 366 horas del cultivo (26% de consumo). Los valores de sulfato de amonio iniciaron en 0,215 g/L y llegaron hasta un valor final de 0,147 g/L al final del cultivo (31,6% de consumo). Estos resultados indican la posibilidad de cultivar G. diazotrophicus a escala piloto e industrial empleando una fuente de carbono de bajo costo relativo. Considerando la literatura consultada éste es el primer reporte de evaluación del crecimiento de G. diazotrophicus empleando la determinación de biomasa por peso seco, el cual es fundamental para el modelamiento del crecimiento de la bacteria.